肝素親和柱
肝素親和柱可特異吸附乳鐵蛋白。
試樣中的牛乳鐵蛋白經磷酸鹽緩沖液提取，再通過肝素親和柱富集凈化后,可以直接用于HPLC分析。
Lubex肝素親和柱與HPLC配合使用可達到快速測定的目的，改善信噪比，提高檢測方法的準確度。
柱容量驗證牛乳鐵蛋白回收率≥95%。
乳鐵蛋白（Lactoferrin, Lf）是一種主要存在于哺乳動物乳汁中的糖蛋白，相對分子量約為80KDa。
乳鐵蛋白在體內不僅參與鐵的轉運，還具有抗 菌、抗病毒、抗氧化和免 疫調節的功能。
乳鐵蛋白被認為是一種新型的抗 菌、抗 癌 藥 物和具有開發潛力的食品和飼料添加劑，目前已被廣泛添加于嬰幼兒食品中。
2021年發布的《食品安 全 國家標準食品中乳鐵蛋白的測定》（征求意見稿）中，對肝素親和柱的柱容量驗證方法提出了大于80%回收率的要求。
而即將實施的GB 5009.299-2024《食品安 全 國家標準 食品中乳鐵蛋白的測定》則進一步提高了回收率標準，要求牛乳鐵蛋白回收率達到至少95%，并且每批次樣品至少測試兩根肝素親和柱進行驗證。
市場上主流品牌如G家應用于舊國標的肝素親和柱回收率在92%~96%之間，略低于新標準的要求。
為了符合*新標準，Lubex推出了專為樣品前處理設計的肝素親和柱。
本研究采用了符合國家標準的方法進行驗證，結果顯示回收率接近100%，完全符合新標準的要求。
Lubex 肝素親和柱
一、試劑配制
磷酸鹽緩沖液Ⅰ：
稱取7.1 g磷酸氫二鈉、58.4 g氯化鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現配。
磷酸鹽緩沖液Ⅱ：
稱取28.4 g磷酸氫二鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調節pH至7.5±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現配。
0.1%三氟乙酸溶液：
量取1 mL三氟乙酸注入900 mL水中，用水稀釋至1000 mL，過0.45 μm濾膜。
二、樣品處理
牛乳鐵蛋白標準儲備溶液(5.0mg/mL)：
稱取50mg(精 確至0.1mg)牛乳鐵蛋白標準品用水溶解,轉移至10mL容量瓶并定容至刻度,混勻,0℃~4℃條件下保存,可保存3個月。
三、操作程序
活化：
取出Lubex肝素免 疫親和柱， 肝素親和柱先用5mL磷酸緩沖液Ⅱ活化，準確移取10ml上清液過柱；
用10ml磷酸緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用5mL磷酸緩沖液Ⅰ洗脫，收集洗脫液并用磷酸緩沖液Ⅰ定容至5mL，渦旋混勻，過0.45μm水相針式濾器后待測。
四、操作條件
1)色譜柱: ECOSIL C4 5μm 250mm×4.6mm 300?
2)檢測波長: 280nm
3)柱溫: 30℃
4)進樣體積: 50μL
5)流速: 1.0mL/min
6)流動相: 0.1%三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脫參數見表1。
五、柱容量驗證圖譜
圖一 肝素親和柱1譜圖
圖二 肝素親和柱2譜圖
六、柱容量驗證數據
表2 柱容量驗證數據
七、實驗結論
本文按照國標方法驗證了Lubex肝素親和柱的柱容量，回收率均＞95%，滿足國標對于柱容量的要求。
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